Efecto del tampón de transfección diseñado a medida en la administración de componentes de modificación del genoma en células primarias de búfalos, ganado vacuno, cabras y ovejas
Resumen
La transferencia de componentes de modificación del genoma a células de animales de granja es indispensable para la producción de animales de granja transgénicos y con el genoma modificado. La electroporación es un método de transfección física cuando se utiliza adecuadamente. Esta técnica es segura, sencilla de utilizar, asequible y eficaz para transfectar células de varios linajes. La eficiencia de la electroporación depende de varios parámetros físicos, de los cuales el tipo de célula se considera un factor importante para la eficiencia de la transfección. Las células primarias son generalmente menos susceptibles a la transfección que otros tipos de células debido a su vida útil finita y su capacidad de expansión limitada. Anteriormente, diseñamos un tampón de transfección personalizado para administrar componentes genéticos exógenos a células de mamíferos. En el presente estudio, examinamos el efecto del tampón desarrollado sobre las tasas de transfección y la viabilidad celular de células somáticas primarias de búfalos, bovinos, caprinos y ovinos. Para lograr los objetivos de este estudio, se establecieron células somáticas primarias de biopsias de piel y se transfectaron con un vector de expresión de Venus (pAcGFPs-Venus). Notamos que las tasas de transfección de pAcGFPs-Venus fueron 22,51%, 17,56%, 22,81% y 16,16% para células de búfalo, ganado vacuno, cabras y ovejas, respectivamente. También notamos que la viabilidad celular y las tasas de proliferación eran mejores en el caso de células de cabras, ovejas y vacunos; además, estas células tienen menos vacuolización que las células de búfalo. También generamos clones de células MSTN (miostatina) KO (Knoc-kout) a partir de estas poblaciones de células, en las que la eficiencia de la generación de clones unicelulares fue alta para células de cabras y ovejas. En conclusión, nuestro tampón de transfección fabricado en laboratorio se puede utilizar de manera eficiente para generar animales de granja transgénicos o editados con genoma para aplicaciones agrícolas, biomédicas y veterinarias.
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