La crocina mejora la calidad post-descongelación, la expresión genética asociada a la fertilidad y el potencial de fertilización del semen de búfalo
Resumen
Los espermatozoides de búfalo sufren más criolesiones debido a la peroxidación lipídica de su alto contenido de ácidos grasos poliinsaturados estructurales que el ganado vacuno. En consecuencia, el potencial de fertilización del espermatozoide de búfalo después de la descongelación se ve comprometido. La crocina es un carotenoide conocido por su potencial antioxidante al eliminar especies reactivas de oxígeno. El estudio actual investigó el efecto de la adición de crocina en el diluyente de semen sobre la calidad post-descongelación, la expresión genética asociada a la fertilidad y el potencial de fertilización del espermatozoide de búfalos. Las muestras de semen (n=32) de cuatro toros búfalo Nili-Ravi se extendieron con un diluyente de ácido tris-cítrico que contenía diferentes concentraciones de crocina (0 mM; control, 0,5, 1, 1,5 y 2 mM). El semen extendido se envasó en pajillas (pajuelas) francesas de 0,5 ml (25 x 106 espermatozoides/pajita) y se criopreservó utilizando un protocolo de congelación con vapor de nitrógeno líquido. Se utilizaron análisis de semen asistido por computadora, evaluación de la zona de cresta apical normal, rodamina 123, naranja de acridina y tinción con yoduro de propidio para evaluar los parámetros de motilidad de los espermatozoides, integridad acrosómica, potencial de membrana mitocondrial, integridad del ADN y viabilidad, respectivamente. Los niveles de expresión de los genes SPACA3 asociado al acrosoma del esperma, PRM1 relacionado con la condensación de ADN, BCL2 antiapoptótico, BAX proapoptótico y ROMO1 asociado al estrés oxidativo se evaluaron mediante qPCR. La fertilidad in vivo de dosis de semen que contenían crocina 1 mM se comparó con la del control. Las búfalas fueron inseminadas 24 horas después del inicio del estro natural y palpadas trans-rectalmente para detectar preñez al menos 60 días después de la inseminación. Los datos se analizaron mediante PROC MIXED o PROC GLIMMIX utilizando SAS. Se aplicó la prueba de Tukey para comparaciones múltiples entre tratamientos. La evaluación posterior a la descongelación reveló que 0,5 y 1 mM de crocina mejoraron la motilidad total, la integridad de la membrana plasmática, la integridad del acrosoma, el potencial de la membrana mitocondrial y la viabilidad, y una y 1,5 mM de crocina mejoraron la actividad catalasa y redujeron la peroxidación lipídica en comparación con el control (p<0,05). Además, la crocina 1 mM mejoró la motilidad progresiva, la cinemática y la integridad del ADN que el control (p<0,05). Los niveles de expresión de los genes SPACA3, PRM1 y BCL2 fueron mayores (p<0,05) con crocina 1 mM, mientras que no se observaron diferencias (p>0,05) en la expresión del gen BAX entre todos los grupos. Además, la expresión del gen ROMO1 fue mayor (p<0,05) con crocina 2 mM en comparación con crocina 1 mM y 1,5 mM. Las dosis de semen que contenían crocina 1 mM mostraron una tasa de fertilidad más alta en comparación con el control [56 ± 0,03% (112/200) frente a 46 ± 0,04% (92/200), respectivamente; p=0,0465]. En conclusión, la adición de 1 mM de crocina en el diluyente de semen mejora la calidad post-descongelación, la expresión genética asociada a la fertilidad y el potencial de fertilización del esperma de búfalo.
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