Un primer estudio sobre sexado de espermatozoides en búfalos de agua mediante nanopartículas magnéticas
Resumen
La preselección de sexo en ganadería es una herramienta genética de importancia económica, ya que permite a los criadores de animales producir progenie de sexo específico, aumentando así la rentabilidad y la ganancia genética en la industria ganadera. Es preferible un mayor porcentaje de terneras para la producción lechera. En Pakistán, los búfalos de agua se crían principalmente con fines lácteos. Por lo tanto, este estudio fue diseñado para optimizar la técnica de sexado de semen basada en nanopartículas magnéticas (MNP) en búfalos de agua. Se reunieron muestras de semen calificadas de cinco búfalos reproductores y se dividieron en cuatro alícuotas. Cada alícuota de 50 millones de espermatozoides se diluyó en 1 ml de líquido tubárico humano modificado (mHTF). Se incubaron tres alícuotas (grupos sexados) con 0,67 ml de suspensión de MNP cargada negativamente. La cuarta alícuota se incubó sin MNP (llamada “grupo de control”). Cada tubo que contenía suspensión de esperma-MNP se agitó lentamente durante 5 minutos para una mezcla uniforme. Los MNP estaban cargados negativamente y (proporcionados por Clemente Associates Inc, Prescott, Arizona, EE. UU.) y tenían un diámetro de 50 nanómetros. La interacción entre la carga negativa de las MNP y el potencial eléctrico Z de los espermatozoides fue diferente para aquellos espermatozoides que portan un cromosoma X (-20 mV) y aquellos que portan un cromosoma Y (-16 mV). Por lo tanto, los espermatozoides portadores del cromosoma Y permanecieron más cerca de las MNP. Se expusieron tres grupos sexados a un imán durante 10, 20 y 30 minutos. El grupo de control estuvo expuesto al imán durante 20 minutos. En consecuencia, en los grupos sexados, los complejos espermatozoide-MNP con carga cromosómica Y permanecieron adheridos a la pared interna del tubo debido a la fuerza magnética. Por el contrario, los espermatozoides del cromosoma X permanecieron suspendidos en el medio. Luego, se aspiraron lentamente los espermatozoides suspendidos que portaban el cromosoma X. El grupo de control también fue aspirado y transferido a un tubo nuevo. Después de la aspiración, se evaluó la motilidad progresiva (PM, %) de los espermatozoides de cada grupo mediante un analizador de esperma asistido por computadora (CASA). Después de eso, los espermatozoides se centrifugaron a 226 × g durante 5 minutos para eliminar el mHTF y se extrajo el ADN. La validación de la técnica de sexado se realizó mediante PCR en tiempo real (RT-PCR) SYBR® Green utilizando dos conjuntos de cebadores para genes específicos de género, es decir, proteína proteolípida ligada al cromosoma X (PLP) y proteína de la región Y determinante del sexo (SRY). Los resultados revelaron que la MP fue similar (p>0,05) en todos los grupos (entre 62 y 65%). La expresión media del gen PLP (esperma con cromosoma X) fue mayor (p<0,05) en todos los grupos sexados (promedio: 15,34 veces= 91,09% de esperma con cromosoma X) en comparación con el control (1,60 veces). En conclusión, la técnica basada en MNP mostró ser un método eficaz para el sexado de semen de búfalo de agua, validado por RT PCR.
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