Las vesículas extracelulares (EV) en el plasma seminal de los toros búfalo poseen proteínas y enzimas asociadas a la fertilidad específicas de los espermatozoides
Resumen
Los búfalos son la columna vertebral de la industria ganadera y láctea de la India. Contribuyen con casi el 53 % de la producción de leche y el 30% de la producción de carne en a India. La fertilidad de los toros es vital para la productividad, la sostenibilidad y la cría eficiente de búfalos. El presente estudio tuvo como objetivo evaluar el marcador de fertilidad basado en vesículas extracelulares (EV) en el plasma seminal de toros búfalinos. El plasma seminal de búfalos de fertilidad contrastante se utilizó para purificar vesículas extracelulares mediante cromatografía de exclusión por tamaño (SEC). Se utilizaron dispersión de luz por difracción (DLS), ensayo de nanoseguimiento (NTA) y Western Blot para confirmar las EV del plasma seminal. Se obtuvo una población pura de vesículas extracelulares en fracciones de 7 a 12 SEC con un tamaño de vesículas extracelulares promedio de 161 nm. El análisis NTA proporciona una abundancia cuantitativa de EV, y la población de EV fue de 1,5 x 109 a 2,9 x 1011 EV/ml en plasma seminal. Utilizando el método de transferencia Western, la abundancia de la proteína SPAM-1 en las vesículas extracelulares fue significativamente alta en los toros de alta fertilidad (HF) en comparación con los del grupo de baja fertilidad (LF) (p<0,05). Sin embargo, la proteína 7 que contiene el dominio de desintegrina y metaloproteinasa (ADAM-7) y la proteína acrosómica SP-10 no fueron significativamente diferentes en las EV seminales de toros HF y LF. De manera similar, la abundancia de Gelectina-3 y aldosa reductasa (AR) fue comparativamente mayor en los grupos con HF, aunque fue insignificante. El factor de fertilidad, la proteína CD9, fue significativamente abundante en las vesículas extracelulares seminales de los toros búfalo HF en comparación con los búfalos LF, lo que sugiere que el CD9 de origen de las vesículas extracelulares seminales podría ayudar a evaluar el estado de fertilidad de los búfalos. La actividad enzimática de la fosfolipasa A2 (PLA2) en HF fue mayor que en las EV seminales de LF, lo que indica una actividad de PLA2 superior en semen de toro altamente fértil. Se evaluó la absorción de proteínas de fertilidad asociadas a EV por parte de los espermatozoides. Observamos que la carga proteica fue asimilada exitosamente por los espermatozoides. Finalmente, se realizó un proteoma de alto rendimiento basado en LC- MS/MS para identificar la abundancia diferencial de la carga de proteínas en vesículas extracelulares seminales de toros de fertilidad contrastante. Identificamos las veinte proteínas con abundancia diferente en las vesículas extracelulares seminales de toros HF frente a toros LF. Las proteínas identificadas estaban fuertemente relacionadas con las funciones de los espermatozoides. Por lo tanto, el presente estudio respalda que las vesículas extracelulares seminales de búfalos poseen proteínas y enzimas vitales asociadas a la fertilidad, que podrían ser marcadores importantes para evaluar la fertilidad de los búfalos.
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