368
Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2020, 37: 368-386. Octubre-Diciembre.
ISSN 2477-9407
Esta publicación cientíca en formato digital es continuación de la Revista Impresa: Depósito legal pp 196802ZU42, ISSN 0378-7818.
Recibido el 05-04-2020 . Aceptado el 15-06-2020.
*Autor de correspondencia. Correo electrónico: lhernandez@cibnor.mx
Efectividad del extracto etanólico de Lippia
palmeri Wats para el manejo de Fusarium spp. en
semillas de garbanzo
Effectiveness of ethanolic extract of Lippia palmeri Wats
for the management of Fusarium spp. in chickpea seeds
Efetividade do extrato etanólico de Lippia palmeri Wats
no manejo de Fusarium spp. em sementes de grão de bico
Mirella Romero-Bastidas
1
, Juan Jose Reyes-Perez
2
, Esli
Alexis Mayer-Felix
1
, José Saúl Hernandez-Rubio
1
, Pablo
Misael Arce-Amezquita
1
, Luis Guillermo Hernandez-
Montiel
3*
1
Departamento Académico de Agronomía, Universidad Autónoma de Baja
California Sur. Carretera al sur km 5.5, Col. El Mezquitito. 23080, La Paz,
Baja California Sur. México. Correo electrónico: (MR) miromero@uabcs.
mx,
; (EM) eslimayer@gmail.com, ; (JH) saulhr@gmail.com ; (PA)
parce@uabcs.mx,
.
2
Universidad Técnica Estatal de Quevedo. Av. Quito,
Km 1,5 vía a Santo Domingo, Quevedo, Los Ríos, Ecuador. Correo
electrónico: jreyes@uteq.edu.ec,
.
3
Centro de Investigaciones Biológicas
del Noroeste. Calle Instituto Politécnico Nacional 195. Col. Playa Palo
de Santa Rita Sur. 23096, La Paz, Baja California Sur, México. Correo
electrónico: lhernandez@cibnor.mx, .
Resumen
El garbanzo es un cultivo de importancia mundial debido a su valor nutricional,
sin embargo, la cosecha se ve afectada por enfermedades en semillas y raíz
ocasionadas por Fusarium spp., y para su control se aplican fungicidas sintéticos,
por lo que los productos naturales basados en extractos de plantas pueden ser una
opción para el manejo sustentable de enfermedades de este cultivo. El objetivo
de esta investigación fue determinar la eciencia in vitro e in vivo del extracto
etanólico de Lippia palmeri
para el control de Fusarium oxysporum y F. solani
en semillas de garbanzo. Al medio PDA se le añadió 500, 1000 y 2000 ppm del
extracto etanólico de L. palmeri más un disco de agar de cada patógeno y se midió
la inhibición del crecimiento micelial. Semillas de garbanzo fueron sumergidas
DOI: https://doi.org/10.47280/RevFacAgron(LUZ).v37.n4.03
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en cada concentración de L. palmeri por cinco y 10 min, posteriormente, cada
semilla se inoculó con F. oxysporum y F. solani y se determinó la incidencia de
la enfermedad y el número de semillas germinadas. Las tres concentraciones de
L. palmeri inhibieron in vitro a ambos patógenos. En las semillas, el extracto
etanólico de L. palmeri disminuyó la incidencia de F. solani y mantuvo por
encima del 80 % la germinación. Para F. oxysporum solo la dosis más alta del
extracto etanólico y el mayor tiempo de exposición disminuyó 20 % la incidencia y
la germinación fue menor de 25 %. El extracto etanólico de L. palmeri puede ser
una opción para disminuir enfermedades ocasionas por hongos topatógenos del
suelo en semillas de garbanzo
Palabras clave: antifúngicos, Fusarium solani, Fusarium oxysporum,
germinación.
Abstract
Chickpea is a crop of world importance due to its nutritional value; however,
seed and root diseases caused by Fusarium spp. affect the harvest and for its
control, synthetic fungicides are applied; nevertheless, natural products based
on plant extracts may be an option for the sustainable management of this crop
diseases. The objective of this research was to determine the in vitro and in vivo
efciency of the Lippia palmeri extract for the control of Fusarium oxysporum
and F. solani in chickpea seeds. To PDA media, 500, 1000 and 2000 ppm from
ethanolic extract of L. palmeri plus one agar disc of each pathogen, and the
inhibition of mycelial growth was quantied. Chickpea seeds were submerged in
each concentration of L. palmeri for 5 and 10 min, later, each seed was inoculated
with F. oxysporum and F. solani and the disease incidence and germinated
seeds were determined. The three concentrations of L. palmeri inhibited both
phytopathogens in vitro. In the seeds, L. palmeri ethanolic extract decreased the
incidence of F. solani and kept germination above 80 %. For F.oxysporum only
the highest dose of the ethanolic extract and the longest exposure time decreased
the incidence by 20 % and germination was less than 25 %.The ethanolic extract
of L. palmeri can be an option to decrease diseases caused by phytopathogenic
fungus of the soil in chickpea seeds.
Key words: antifungal, Fusarium solani, Fusarium oxysporum, germination.
Resumo
O grão-de-bico é uma cultura de importância global devido ao seu valor
nutricional; no entanto, a cultura é afetada por doenças de sementes e raízes
causadas por Fusarium spp. E são aplicados fungicidas sintéticos para controlá-
lo, portanto, produtos naturais à base de nos extratos vegetais, podem ser uma
opção para o manejo sustentável das doenças dessa cultura. O objetivo desta
investigação foi determinar a eciência in vitro e in vivo do extrato etanólico de
Lippia palmeri para o controle de Fusarium oxysporum e F. solani em sementes
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de grão de bico. Ao meio PDA, 500, 1000 e 2000 ppm do extrato etanólico de L.
palmeri mais um disco de ágar de cada patógeno foram adicionados e a inibição
do crescimento micelial foi medida. Sementes de grão-de-bico foram imersas em
cada concentração de L. palmeri por cinco e 10 minutos e, posteriormente, cada
semente foi inoculada com F. oxysporum e F. solani, determinando-se a incidência
da doença e o número de sementes germinadas. As três concentrações de L.
palmeri inibiram ambos os patógenos in vitro. Nas sementes, o extrato etanólico
de L. palmeri diminuiu a incidência de F. solani e manteve a germinação acima de
80 %. Para F. oxysporum, apenas a dose mais alta do extrato etanólico e o maior
tempo de exposição diminuíram a incidência em 20 % e a germinação foi menor
que 25 %. O extrato etanólico de L. palmeri pode ser uma opção para reduzir
doenças causadas por fungos topatogênicos do solo em sementes de grão de bico
Palavras-chave: antifúngicos, Fusarium solani, Fusarium oxysporum,
germinação.
Introducción
La demanda constante de agro-
productos libres de plaguicidas
sintéticos ha obligado a implementar
alternativas de producción, libres
de residuos químicos dentro de los
sistemas agrícolas (Sayuri et al.,
2018). Sin embargo, el control de
hongos topatógenos sin el uso
tradicional de plaguicidas sintéticos
ha sido uno de los principales retos
para el manejo sustentable de los
cultivos. Actualmente, los productos
naturales basados en extractos de
plantas han generado un gran interés
para el manejo de topatógenos, con
la ventaja de que no presentan un
impacto negativo al ambiente ni a
la salud humana o animal (Shirazi
et al., 2020). Entre los diferentes
compuestos antifúngicos que
contienen los extractos de plantas
destacan los alcaloides, taninos,
quinonas, cumarinas, compuestos
fenólicos y toalexinas (Wangkhem et
al., 2019), los cuales, han controlado
Introduction
The constant demand of agro-
products free of synthetic pesticides
has forced to implement production
alternatives, free of chemical residues
within agricultural systems (Sayuri
et al., 2018). However, the control of
phytopathogenic fungus without the
traditional use of synthetic pesticides
has been one of the main challenges
for the sustainable management of
crops. Nowadays, natural products
based on plant extracts have
generated a big interest for the
management of phytopathogens,
with the advantage that they do
not have a negative impact on the
environment or on human or animal
health (Shirazi et al., 2020). Among
the different antifungal compounds
contained in plant extracts, there
are: alkaloids, tannins, quinones,
coumarins, phenolic compounds and
phytoalexins (Wangkhem et al., 2019),
which have controlled efciently to
various phytopathogenic fungus
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de manera eciente a diversos hongos
topatógenos como; Botrytis cinerea
(Şesan et al., 2015), Colletotrichum
spp. (Melo et al., 2016), Fusarium
spp. (Wang et al., 2016), Phytophthora
capsici (Tala et al., 2018), entre otros.
El orégano (Lippia palmeri Wats) de
la familia Verbenaceae, ha sido usado
tradicionalmente en la medicina popular
para disminuir problemas respiratorios,
digestivos, dolores de cabeza, reumatismo,
entre otros (Leyva-López et al., 2016).
Además, se han estudiado sus propiedades
farmacológicas (Gutiérrez-Grijalva et al.,
2019), antioxidantes (Gutiérrez‐Grijalva et
al., 2019) y antimicrobianas (Ortega-Nieblas
et al., 2011). De la gama de compuestos
químicos que presenta L. palmeri, destacan
el carvacrol, timol, eugenol y cimeno,
debido a su alta acción antimicrobiana,
causando principalmente disrupción de
las membranas y paredes celulares de los
microorganismos (Oyedemi et al., 2009;
Tornuk et al., 2014).
El extracto etanólico de L. palmeri
ha sido eciente para el control de
diversos patógenos de humanos como
Escherichia coli y Staphylococcus
aureus (Ortega-Nieblas et al., 2011)
y topatógenos como
&ODYLEDFWHUmichiganensissubespecie
michiganensis (Borboa-Flores et al.,
2010). Hasta ahora, según concierne
a los autores de este trabajo, no
existen reportes de su aplicación
para el control de hongos de raíz, los
cuales, son uno de los topatógenos
más comunes y severos de diversos
cultivos.
El garbanzo (Cicer arietinum L.),
es un cultivo que se destaca por su
alto valor nutricional, sin embargo, la
cosecha se ve disminuida por diversos
such as; Botrytis cinerea (Şesan et
al.,2015), Colletotrichum spp. (Melo
et al.,2016), Fusarium spp. (Wang et
al.,2016), Phytophthora capsici (Tala
et al.,2018), among others.
The oregano (Lippia palmeri Wats)
of the Verbenaceae family, has been
traditionally used in popular medicine
to decrease respiratory and digestive
problems, headaches, rheumatism,
among others (Leyva-López et al.,
2016). In addition, its pharmacological
(Gutiérrez-Grijalva et al., 2019),
antioxidants (Gutiérrez-Grijalva et
al., 2019) and antimicrobials (Ortega-
Nieblas et al., 2011) properties have
been studied. From the range of
chemical compounds that L. palmeri
presents, there are the carvacrol,
thymol, eugenol and cymene, due to
its high antimicrobial action, mainly
causing disruption of the membranes
and cell walls of microorganisms
(Oyedemi et al., 2009; Tornuk et al.,
2014).
The ethanolic extract of L.
palmeri has been efcient for the
control of various human pathogens
such as Escherichiacoli and
Staphylococcus aureus (Ortega-Nieblas
et al., 2011) and phytopathogens
such as Clavibacter michiganensis
subspecie michiganensis (Borboa-
Flores et al., 2010). Until now,
according to the authors of this work,
there are no reports of its application
for the control of root fungus, which
are one of the most common and severe
phytopathogens of various crops.
The chickpea (Cicer arietinum L.),
is a crop that stands out for its high
nutritional value, however, the harvest
is diminished by various factors,
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factores, destacando las enfermedades
ocasionadas por diversos hongos
topatógenos (Sankar et al., 2019).
Fusarium oxysporum y F. solani son
dos hongos que causan enfermedades
en semillas y raíz de plantas de
garbanzo y están considerados como
topatógenos de importancia debido a
su amplia distribución mundial y a las
pérdidas que producen anualmente,
dentro de los principales síntomas
que ocasionan están las pudriciones
y/o necrosis en la semilla o pudrición
y/o necrosis de raíz y marchitamiento
general que provocan la muerte de las
plantas en vivero o campo (Sunkad et
al., 2019).
En México, la variedad de
garbanzo Blanco Sinaloa genera
un grano con mayor demanda del
mercado internacional, no obstante,
ha mostrado susceptibilidad a las
enfermedades de raíz (Frac et al.,
2016), por lo que el uso del extracto
etanólico de L. palmeri pudiera ser
una alternativa para el control de
hongos topatógenos en esta especie.
El objetivo del presente estudio fue
evaluar la eciencia in vitro e in vivo
del extracto etanólico de L. palmeri
para el control de F. oxysporum y F.
solani en semillas de garbanzo.
Materiales y métodos
Obtención de la semilla
Se utilizaron semillas de garbanzo
de la variedad Blanco Sinaloa (INIFAP,
Ortega-Murrieta et al., 2016), donada
por productores de la región agrícola
“Valle de Santo Domingo” ubicada en
Ciudad Constitución, Baja California
Sur, México (25°01′56″ N, 111°40′13″ O).
highlighting the diseases caused by
various phytopathogenic fungus
(Sankar et al., 2019). F.
oxysporum and F. Solani are two
fungus that cause diseases in seeds
and roots of chickpea plants and they
are considered phytopathogens of
importance due to their wide global
distribution and the losses that they
produce annually, among the main
symptoms that they cause there are
rots and / or necrosis in the seed or
rot and / or root necrosis and general
withering that causes the death
of plants in seedling center or eld
(Sunkad et al., 2019).
In Mexico, the Blanco Sinaloa
chickpea variety generates a
grain with higher demand in the
international market, however, it
has shown susceptibility to root
diseases (Frac et al., 2016), so the
use of L. palmeri ethanolic extract
could be an alternative for the control
of phytopathogenic fungus in this
specie.
The objective of the present research
was to evaluate the in vitro and in
vivo efciency of L. palmeri ethanolic
extract for the control of F. oxysporum
and F. solani in chickpea seeds.
Materials and methods
Seeds collection
Chickpea seeds of Blanco Sinaloa
variety were used (INIFAP, Ortega-
Murrieta et al., 2016), donated
by producers from the “Valle de
Santo Domingo” agricultural region
located in Ciudad Constitución, Baja
California Sur, Mexico (25° 01′56″ N,
111°40′13″ O).
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Hongos topatógenos
Los aislamientos de F. oxysporum
y F. solani fueron suministrados
por el Laboratorio de Fitopatología
del Departamento Académico de
Agronomía, Universidad Autónoma de
Baja California Sur. F. oxysporum y F.
solani, fueron reactivados en placas
Petri con el medio de cultivo papa-
dextrosa-agar (PDA) y se incubaron a
28 °C por siete días.
Prueba de patogenicidad
Para determinar la patogenicidad
de F. oxysporum y F. solani se
utilizaron semillas de garbanzo
previamente esterilizadas con una
solución de NaClO al 1 %
m
/
v
durante
dos min, posteriormente, se lavaron
con agua destilada estéril y se dejaron
secar por 30 min. La concentración
de cada topatógeno se ajustó a 1
× 10
4
esporas.mL
-1
utilizando un
hematocitómetro y cada semilla fue
inoculada con 20 µL de cada una
de las suspensiones conidiales de
F. oxysporum y F. solani. Se utilizó
un lote de semillas sin topatógeno
como grupo control. Las semillas se
incubaron en una cámara ambiental
a 28 ± 2 °C y 12 h de luz/oscuridad
por siete días. La incidencia de la
enfermedad (%) fue determinada en
semillas con presencia de micelio y
síntomas de pudriciones ocasionadas
por los hongos, los cuales, fueron re-
aislados en PDA para comprobar los
postulados de Koch. Se utilizaron
30 semillas por tratamiento y el
experimento fue realizado dos veces.
Material vegetal y preparación de
extractos etanólicos de L. palmeri
Se colectaron plantas silvestres
de Lippia palmeri en La Paz, Baja
Phytopathogenic fungus
The isolations of F. oxysporum
and F. Solani were provided by
the Laboratorio de Fitopatología
del Departamento Académico de
Agronomía, Universidad Autónoma
de Baja California Sur. F. oxysporum
and F. solani, were reactivated in Petri
dishes with the potato-dextrose-agar
(PDA) culture media and incubated at
28° C for seven days.
Pathogenicity test
To determine the pathogenicity of
F. oxysporum and F. solani, chickpea
seeds previously sterilized with a
solution of NaClO at 1 %
m
/
v
during 2
min were used, later, they were washed
with sterile distilled water and left to
dry for 30 min. The concentration of
each phytopathogen was adjusted
to 1 × 10
4
spores. mL
-1
using a
hematocytometer and each seed was
inoculated with 20 µL of each of the
F. oxysporum and F. solani conidial
suspensions. A batch of seeds without
phytopathogen was used as a control
group. The seeds were incubated in an
environmental chamber at 28 ± 2 °C
and 12 h of light/darkness for seven
days. The incidence of the disease
(%) was determined in seeds with the
presence of mycelium and symptoms
of rot caused by fungus, which were
re-isolated in PDA to verify Koch’s
postulates. Thirty seeds were used per
treatment and the experiment was
carried out twice.
Plant material and preparation of
L. palmeri ethanolic extracts
Wild plants were collected from
Lippia palmeri in La Paz, Baja
California Sur, Mexico (24°08′32 ″ N,
110°18′39 ″ W).
To obtain the ethanolic
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California Sur, México (24°08′32″ N,
110°18′39″ O). Para obtener el extracto
etanólico (EE), las plantas se secaron a
temperatura ambiente (25 ± 2 °C) por
siete días. Posteriormente, el material
seco se trituró y se depositaron 300
g en recipientes de vidrio de 1 L,
conteniendo 900 mL de etanol al 96
%
v
/
v
. Los recipientes fueron sellados
y almacenados por siete días a 25 °C
en completa oscuridad. El macerado
en etanol fue ltrado a través de papel
de ltro Wathman No. 4 y el etanol fue
evaporado en un evaporador rotativo
(Buchi B-480) a 40 °C, hasta sequedad
completa. El extracto etanólico de L.
palmeri se mantuvo a temperatura de
-4 °C, hasta su uso.
Evaluación in vitro de la actividad
antifúngica del extracto etanólico de
L. palmeri
El efecto del extracto etanólico
de L. palmeri sobre la inhibición del
crecimiento micelial de F. oxysporum
y F. solani fue evaluado mediante el
método de difusión en agar propuesto
por Soylu et al. (2007). El volumen de
PDA necesario para dispensar 15 mL/placa
Petri fue preparado y esterilizado,
una vez alcanzada la temperatura
de 40 °C, se le agregó el volumen del
extracto etanólico necesario para
obtener las concentraciones de 500,
1000 y 2000 ppm, posteriormente,
se colocó en el centro de las placas
un disco de 0,5 cm de diámetro
proveniente de un cultivo en PDA
de siete días de cada topatógeno.
Un grupo de placas con PDA fueron
mezcladas con el fungicida sintético
Captan (1 % N-triclorometiltio-4-
ciclohexano-1,2-dicarboximida) a una
dosis de 0,2 mg.mL
-1
e inoculadas
extract (EE), the plants were dried
at room temperature (25 ± 2 °C) for
seven days. After, the dry material
was crushed and 300 g were deposited
in 1 L glass containers, containing 900
mL of 96 %
v
/
v
ethanol. The containers
were sealed and stored for seven days
at 25 ° C in complete darkness. The
macerated in ethanol was ltered
through Wathman No.4 lter paper
and the ethanol was evaporated on
a rotary evaporator (Buchi B-480) at
40 °C, until complete dryness. The
ethanolic extract of L. palmeri was
kept at a temperature of -4 °C, until
its use.
In vitro evaluation of the antifungal
activity of L. palmeri ethanolic extract
The effect of L. palmeri ethanolic
extract on the inhibition of mycelial
growth of F. oxysporum and F. solani
was evaluated using the diffusion
method in agar proposed by Soylu
et al. (2007). The volume of PDA
necessary to dispense 15 mL/Petri
dish was prepared and sterilized, once
the temperature of 40 °C was reach,
the volume of the ethanolic extract
necessary to obtain the concentrations
of 500, 1000 and 2000 ppm was added,
later, in the center of the plates a 0.5
cm diameter disc from the culture in
PDA of each pathogen was placed.
A group of plates with PDA were
mixed with the Captan synthetic
fungicide (1 % N-trichloromethylthio-
4-cyclohexane-1.2 -dicarboximide) at
a dose of 0.2 mg.mL
-1
and inoculated
with each phytopathogen. As control
treatment, PDA with ethanol at
96 %
v
/
v
and phytopathogen were
mixed. The plates were incubated at
28 °C for 10 days. Ten replicates per
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con cada topatógeno. Como
tratamiento control se mezcló PDA
con etanol al 96 %
v
/
v
y topatógeno.
Las placas fueron incubadas a 28
ºC por 10 días. Se utilizaron diez
réplicas por tratamiento. Al nal del
experimento, se midió el diámetro
(mm) del crecimiento radial de cada
topatógeno y se expresó en porcentaje
(%) de inhibición mediante la fórmula
propuesta por Daryaei et al. (2016):
IM (%) = 100 × (C – R)/C
Dónde:
IM: Inhibición radial del
topatógeno en porcentaje
C = Diámetro de la colonia del
tratamiento control
R = Diámetro de la colonia del
topatógeno de cada tratamiento
Efecto del extracto etanólico de
L. palmeri sobre la germinación y la
pudrición de las semillas de garbanzo
causada por F. oxysporum y F. solani
Se utilizaron semillas de garbanzo
previamente esterilizadas con una de
solución de NaClO al 1 %
m
/
v
por dos
min, posteriormente, se lavaron con
agua destilada estéril y se dejaron secar
por 30 min. Lotes de semillas fueron
embebidos en tres concentraciones
(500, 1000 y 2000 ppm) del extracto
etanólico de L. palmeri por cinco y
10 min. Seguidamente, cada semilla
fue inoculada con 20 µL de cada
suspensión conidial (previamente
ajustada a 1 × 10
4
esporas.mL
-1
) de
F. oxysporum y F. solani. Lotes de
semillas fueron inoculados con cada
topatógeno y el fungicida sintético
Captan (1 % de N-triclorometiltio-4-
ciclohexano-1,2-dicarboximida) a una
treatment were used. At the end of the
experiment, the diameter (mm) of the
radial growth of each phytopathogen
was measured and it was expressed
as a percentage (%) of inhibition by
the formula proposed by Daryaei et al.
(2016):
IM (%) = 100 × (C – R)/C
Where:
IM: Radial inhibition of the
phytopathogen in percentage
C = Diameter of the colony of the
control treatment
R = Diameter of the phytopathogen
colony of each treatment
Effect of the ethanolic extract of
L. palmeri on germination and rot of
chickpea seeds caused by F. oxysporum
and F. solani
Chickpea seeds previously
sterilized with a solution of NaClO at
1%
m
/
v
for 2 min were used, after, they
were washed with sterile distilled
water and they were left to dry for 30
min. Seed lots were submerged in three
concentrations (500, 1000 and 2000
ppm) of L. palmeri ethanolic extract
for 5 and 10 min. Then, each seed was
inoculated with 20 µL of each conidial
suspension (previously adjusted to 1 ×
104 spores. mL
-1
) of F. oxysporum and
F. solani. Seed lots were inoculated
with each phytopathogen and the
Captan synthetic fungicide (1 %
N-trichloromethylthio-4-cyclohexane-
1.2-dicarboximide) at a dose of 0.2
mg.mL
-1
, another with ethanol at 96 %
v
/
v
and one more with sterile distilled
water (ADE). A batch of seeds without
fungus was considered as a control.
The seeds were incubated in an
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dosis de 0,2 mg.mL
-1
, otro con etanol al
96 %
v
/
v
y uno más con agua destilada
estéril (ADE). Un lote de semillas
sin hongos fue considerado como
control. Las semillas se incubaron en
una cámara ambiental a 28 ± 2 °C y
12 h de luz/oscuridad por siete (7)
días. Se determinó el porcentaje de
la incidencia de la enfermedad y el
porcentaje de semillas germinadas. Se
utilizaron 30 semillas por tratamiento
y el experimento fue realizado dos
veces.
Diseño experimental y análisis
estadístico
Se empleó un diseño experimental
completamente al azar y los datos
fueron procesados por un análisis
de varianza (ANOVA) de una vía.
Se utilizó el paquete estadístico
Statistica® v. 10,0 para Windows
(StatSoft) y para la comparación
de medias se utilizó la prueba de
Tukey (p<0,05). Los porcentajes se
transformaron con raíz cuadrada de
arcoseno.
Resultados y discusión
Patogenicidad de F. oxysporum y
F. solani
Ambos hongos tuvieron una
incidencia del 100 % sobre las semillas
de garbanzo. A las 24 h después
de inoculado F. solani, se observó
sobre las semillas de garbanzo un
crecimiento micelial de color blanco a
beige, con textura afelpada o esponjosa
y a los tres (3) días la radícula mostró
síntomas asociados a clorosis de
tejido, acidez y pudrición de la parte
apical. En el caso de F. oxysporum,
a las 24 h las semillas presentaron
environmental chamber at 28 ± 2°C
and 12 h of light/darkness for seven (7)
days. The percentage of the incidence
of the disease and the percentage of
germinated seeds were determined.
Thirty seeds per treatment were used
and the experiment was carried out
twice.
Experimental design and
statistical analysis
A completely randomized
experimental design was used and
the data were processed by a one-way
analysis of variance (ANOVA). The
Statistica® v. 10.0 statistical package
was used for Windows (StatSoft) and
Tukey’s test (p<0.05) was used for the
comparison of means. The percentages
were transformed with arcsine square
root.
Results and discussion
Pathogenicity of F. oxysporum and
F. solani
Both fungus had an incidence
of 100 % on chickpea seeds. At 24 h
after inoculating F. solani, a white
to beige mycelial growth with spongy
texture was observed on the chickpea
seeds and at day three (3) the radicle
showed symptoms associated with
tissue chlorosis, accidity and rot
of the apical part. In the case of F.
oxysporum, at 24 h the seeds presented
plush mycelial growth of white to
purple coloration and at day ve (5)
the radicle presented symptoms of
tissue chlorosis. Re-isolation of both
phytopathogens of chickpea seeds
veried Koch’s postulates.
Chickpea is a crop affected by more
than 50 phytopathogens around the
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crecimiento micelial afelpado de
coloración blanco a purpura y a los
cinco (5) días la radícula presentó
síntomas de clorosis de tejido. El re-
aislamiento de ambos topatógenos
de las semillas de garbanzo comprobó
los postulados de Koch.
El garbanzo, es un cultivo
afectado por más de 50 topatógenos
alrededor del mundo (Nene et al.,
1996; Sankar et al., 2018). Los hongos
topatógenos, constituyen uno de los
grupos de mayor importancia debido
a las pérdidas que ocasionan en los
cultivos. F. solani y F. oxysporum
son dos topatógenos del suelo que
afectan al garbanzo, ocasionando
desde pudrición de semilla hasta
la muerte de la planta, originando
pérdidas económicas en todo el ciclo
del cultivo (El Hazzat et al., 2019;
Tlemsani et al., 2020). Además, el
género Fusarium es considerado
uno de los estresores bióticos para
las plantas más importantes que
presentan resistencia a los fungicidas
sintéticos, complicando su control
(Oliva-Ortiz et al., 2017). Por lo
tanto, la búsqueda de alternativas
para disminuir enfermedades en
las plantas ocasionadas por hongos
topatógenos es una prioridad a nivel
mundial (Shuping y Eloff, 2017).
Efecto del extracto etanólico de L.
palmeri sobre el crecimiento micelial
de F. oxysporum y F. solani
Las tres concentraciones (500 ppm,
1000 ppm y 2000 ppm) del extracto
etanólico de L. palmeri inhibieron
signicativamente el crecimiento
radial de F. solani y F. oxysporum en
comparación al tratamiento control
(gura 1).
world (Nene et al., 1996; Sankar et al.,
2018). The phytopathogenic fungus
are one of the most important groups
due to the losses they cause in crops.
F. solani and F. oxysporum are two soil
phytopathogens that affect chickpea,
producing from seed rot to death of
the plant, causing economic losses
throughout the crop cycle (El Hazzat et
al., 2019; Tlemsani et al., 2020). Also,
the genus Fusarium is considered
one of the biotic stressors for the
most important plants that present
resistance to synthetic fungicides,
complicating their control (Oliva-Ortiz
et al., 2017). Therefore, the search for
alternatives to reduce plant diseases
caused by phytopathogenic fungus
is a worldwide priority (Shuping and
Eloff, 2017).
Effect of L. palmeri ethanolic
extract on the mycelial growth of
F oxysporum and F. solani
The three concentrations (500
ppm, 1000 ppm, and 2000 ppm) of L.
palmeri ethanolic extract signicantly
inhibited the radial growth of F. solani
and F. oxysporum in comparison to
the control treatment (gure 1).
In the case of F. oxysporum, the
concentration of 2000 ppm of L.
palmeri ethanolic extract, inhibited
the phytopathogen by 100 % and for
the case of F. solani, the concentrations
of 1000 and 2000 ppm of this Fabaceae
inhibited it by 100 %. With the Captan
synthetic fungicide the inhibition of F.
oxysporum was 79 % and for F. solani
was 100%. The control (ethanol)
had no inhibition effects on both
phytopathogens (gure 2).
Plant extracts have a broad
antimicrobial activity towards various
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En el caso de F. oxysporum, la
concentración de 2000 ppm del
extracto etanólico de L. palmeri,
inhibió al topatógeno en un 100
% y para el caso de F. solani, las
concentraciones de 1000 y 2000
ppm de esta Fabaceae, lo inhibieron
un 100 %. Con el fungicida
sintético Captan la inhibición de F.
oxysporum fue del 79 % y para F.
solani del 100 %. El control (etanol)
no tuvo efectos de inhibición sobre
ambos topatógenos (gura 2).
Los extractos de plantas
tienen una amplia actividad
antimicrobiana hacia diversos
topatógenos debido al contenido
de sustancias activas como
toalexinas y toantocianinas que
contienen alcaloides, avónidos,
terpenoides, fenoles, glucósidos,
taninos y / o ácidos grasos (Andrade-
Bustamante et al., 2018).
Figura 1. Efecto in vitro del extracto etanólico de Lippia palmeri sobre la inhibición micelial
de F. solani y F. oxysporum. Columnas con letras diferentes indican diferencias
signicativas de acuerdo a la prueba de Tukey (p< 0,05).
Figure 1. In vitro effect of ethanolic extract of Lippia palmeri extract on the mycelial inhibition
of F. solani and F. oxysporum. Columns with different letters indicate signicant
differences according to the Tukey test (p< 0.05).
phytopathogens due to the content of
active substances such as phytoalexins
and phytoanthocyanins that contain
alkaloids, avonides, terpenoids,
phenols, glycosides, tannins and / or
fatty acids (Andrade-Bustamante et
al., 2018).
The ethanolic extract of L. palmeri
inhibited F. solani and F. oxysporum
in vitro and in vivo, which could be
mainly due to the content of aromatic
monoterpenes such as carvacrol
and thymol, and to alkylbenzenep-
cymene, which have been reported as
important antifungals. (Wang et al.,
2018).
Various studies show that these
monoterpenes inhibit phytopathogenic
fungus mainly due to the damage
they cause to their membrane structure,
inhibition of biosynthesis and nucleic
acids function, interference of essential
metabolic processes, induction of
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El extracto etanólico de L. palmeri
inhibió in vitro e in vivo a F. solani
y F. oxysporum, lo cual pudiera
deberse principalmente al contenido
de monoterpenos aromáticos como el
carvacrol y timol, y al alquibenceno
p-cimeno, los cuales, han sido reportados
como importantes antifúngicos (Wang et
al., 2018).
Diversos estudios demuestran que
estos monoterpenos inhiben a los hongos
topatógenos principalmente por el daño
que ocasionan en la estructura de su
membrana, inhibición de la biosíntesis
y función de los ácidos nucleicos,
interferencia de procesos metabólicos
esenciales, inducción de la coagulación
de los componentes citoplásmicos y
la interrupción en la comunicación
celular normal (Radulovic et al., 2013),
inhibición de la fosforilación oxidativa de
la membrana celular y de enzimas como
la celulasa, pectinasa, lacasa, xilanasa,
entre otras, causando una limitación en
Figura 2. Efecto in vitro de tres concentraciones del extracto etanólico de Lippia palmeri sobre el
crecimiento micelial de F. oxysporum y F. solani. Fungicida = Captan (0,2 mg.mL
-1
).
Control = etanol al 96 %
v
/v.
Figure 2. In vitro effect of three concentrations of ethanolic extract of Lippia palmeri on the
mycelial growth of F. oxysporum and F. solani . Synthetic fungicide = Captan (0.2 mg.mL
-1
)
Control = 96 % ethanol
v
/v.
coagulation of cytoplasmic components
and interruption in normal cellular
communication (Radulovic et al., 2013),
inhibition of oxidative phosphorylation of
the cell membrane and of enzymes such
as cellulase, pectinase, laccase, xylanase,
among others, causing a limitation in the
absorption of nutrients (complexation of
metals and insolubilization of proteins)
for the fungus (Lattanzio et al., 2006;
Morales et al., 2017).
Effect of L. palmeri ethanolic
extract on germination and rot of
chickpea seeds caused by F. solani
and F. oxysporum
The different doses of L. palmeri
ethanolic extract signicantly
decreased the incidence of F. solani
and they kept germination of chickpea
seeds over 80 % (gure 3).
The application of 2000 ppm of
L.
palmeri ethanolic extract for 5 and 10
min in the seeds, signicantly reduced
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la absorción de nutrientes (complejación
de metales e insolubilización de
proteínas) para el hongo (Lattanzio et
al., 2006; Morales et al., 2017).
Efecto del extracto etanólico de
L. palmeri sobre la germinación y la
pudrición de las semillas de garbanzo
causada por F. solani y F. oxysporum
Las distintas dosis del extracto
etanólico de L. palmeri disminuyeron
signicativamente la incidencia del F.
solani y mantuvieron sobre el 80 % la
germinación de las semillas de garbanzo
(gura 3).
the incidence of the phytopathogen
by less than 26 %, surpassing the
treatment with Captan synthetic
fungicide. The seeds submerged in
both times with 1000 ppm of the
extract of L. palmeri, presented similar
statistical values to the treatment
with Captan. In treatments with ADE
(sterile distilled water) and ethanol,
the incidence of F. solani was higher
than 82 %. No damaged seeds were
observed in the control treatment.
Regarding to the germination of the
seeds, the control treatment presented
more than 94%. The germination of
Figura 3. Efecto del extracto etanólico de L. palmeri sobre la protección de semillas de garbanzo.
A) Incidencia de F. solani. B) Porcentaje de semillas germinadas. Fungicida = Captan
(0,2 mg.mL
-1
). ADE = agua destilada estéril. Etanol = etanol al 96 %
v
/
v
. Control = sin
topatógeno. Columnas con letras diferentes indican diferencias signicativas de acuerdo a la
prueba de Tukey (p<0,05).
Figure 3. Effect of the ethanolic extract of L. palmeri on the protection of chickpea seeds. A) Incidence of F. solani. B)
Percentage of sprouted seeds. Synthetic fungicide = Captan (0.2 mg.mL
-1
). ADE = sterile distilled water.
Ethanol = 96 % ethanol
v
/
v
. Control = without phytopathogen. Columns with different letters indicate
signicant differences according to the Tukey test (p<0.05).
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La aplicación de 2000 ppm del
extracto etanólico de L. palmeri
por cinco y 10 min en las semillas,
redujeron signicativamente
en menos del 26 % la incidencia
del topatógeno, superando al
tratamiento con el fungicida
sintético Captan. Las semillas
embebidas en ambos tiempos con
1000 ppm del extracto de L. palmeri,
presentaron valores estadísticos
similares al tratamiento con
Captan. En los tratamientos con
ADE (agua destilada estéril) y
etanol, la incidencia de F. solani fue
superior de 82 %. No se observaron
semillas dañadas en el tratamiento
control.
En relación a la germinación
de las semillas, el tratamiento
control presentó más del 94 %.
La germinación de las semillas
embebidas en 2000 ppm del extracto
etanólico de L. palmeri por cinco y
10 min, presentaron valores del
70 y 80 %, respectivamente. Las
semillas con 1000 ppm del extracto
etanólico de L. palmeri, presentaron
valores estadísticos de germinación
similares al tratamiento con Captan.
En los tratamientos con ADE
(agua destilada estéril) y etanol, la
germinación fue menor del 18 %.
Con respecto a la germinación y la
pudrición de las semillas de garbanzo
causada por F. oxysporum
solo la dosis más alta del extracto
etanólico de L. palmeri, disminuyó
signicativamente la incidencia
del hongo cuando las semillas de
garbanzo fueron embebidas por 10
min y la germinación fue del 25 %
(gura 4).
the seeds submerged in 2000 ppm
of L. palmeri ethanolic extract for
ve and 10 min, presented values of
70 and 80 %, respectively. The seeds
with 1000 ppm of L. palmeri ethanolic
extract, presented statistical values of
germination similar to the treatment
with Captan. In the treatments with
ADE (sterile distilled water) and
ethanol, the germination was less
than 18 %.
According to the germination
and rot of chickpea seeds caused
by F. oxysporum, only the
highest dose of L. palmeri ethanolic
extract signicantly decreased the
incidence of the fungus when chickpea
seeds were submerged for 10 min and
germination was of 25 % (gure 4).
The incidence of treatment only
with F. oxysporum was higher than
80 % in the rest of the treatments,
reducing seed germination by less
than 6 %. In the treatments with ADE
(sterile distilled water) and ethanol,
no incidence of F. oxysporum was
observed and the germination of the
seeds was 95 %.
The chickpea seeds submerged
in L. palmeri ethanolic extract were
protected towards F. solani, in
addition to maintain a high level of
germination, overcoming the effect
of the Captan synthetic fungicide,
due to plant extracts are an option
to maintain the vigor and health of
seeds, essential characteristics for the
yield and quality of the crops (Sayuri
et al. 2018).
The L. palmeri ethanolic extract
did not signicantly decrease the
incidence of F. oxysporum, therefore
a low germination of chickpea
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La incidencia del tratamiento solo
con F. oxysporum fue superior al 80
% en el resto de los tratamientos,
disminuyendo la germinación de
las semillas en menos del 6 %. En
los tratamientos con ADE (agua
seeds was quantied, however, the
highest dose and the longest time of
exposure of the seed to the extract
decreased the presence of the
phytopathogen so, it is necessary to
evaluate in future works a longer
Figura 4. Efecto del extracto etanólico de L. palmeri sobre la protección de semillas de garbanzo.
A) Incidencia de F. oxysporum. B) Porcentaje de semillas germinadas. Fungicida =
Captan (0,2 mg.mL
-1
). ADE = agua destilada estéril. Etanol = etanol al 96 %
v
/
v
. Control
= Sin .topatógeno. Columnas con letras diferentes indican diferencias signi.cativas
de acuerdo a la prueba de Tukey (p< 0,05).
Figure 4. Effect of the ethanolic extract of L. palmeri on the protection of chickpea seeds. A)
Incidence of F. oxysporum. B) Percentage of sprouted seeds. Synthetic fungicide
= Captan (0.2 mg.mL
-1
). ADE = sterile distilled water. Ethanol = 96 % ethanol
v
/
v
.
Control = without phytopathogen. Columns with different letters indicate signi.cant
differences according to the Tukey test (p< 0,05).
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End of English Version
exposure time of the seed in higher
doses of the L. palmeri ethanolic
extract to achieve the control of
this phytopathogen. In this regard,
Onaran and Yanar (2016) and
Iqbal et al. (2019), mention the
importance of determining the plant
inhibition dose in plant extracts to
subsequently apply a dose that
guarantees a better efciency for its
control.
The low efciency of the
synthetic fungicide for the control
of F. oxysporum in chickpea seeds is
probably due to the resistance to the
chemical groups of the fungicide, the
virulence of the phytopathogen, host
susceptibility, abiotic conditions,
among others (Mengist et al., 2018).
Conclusions
The L. palmeri ethanolic extract
reduced the radial growth of F. solani
and F. oxysporum in vitro, and its
application in chickpea seeds reduced
the incidence of both phytopathogens.
Plant extracts can be an efcient
option in the management of
phytopathogenic fungus associated
with seeds, being an ecological and
low cost solution.
destilada estéril) y etanol, no se
observó incidencia de F. oxysporum y
la germinación de las semillas fue del
95 %.
Las semillas de garbanzo
embebidas en el extracto etanólico de
L. palmeri fueron protegidas hacia F.
solani, además de mantener un alto
nivel de germinación superando al
efecto del fungicida sintético Captan,
por lo que los
extractos de plantas son
una opción para mantener el vigor y
sanidad de las semillas, características
indispensables para el rendimiento y
calidad de los cultivos (Sayuri et al.
2018).
El extracto etanólico de L. palmeri
no disminuyó signicativamente la
incidencia de F. oxysporum por lo tanto
se cuanticó una baja germinación
de las semillas de garbanzo, sin
embargo, la dosis más alta y el mayor
tiempo de exposición de la semilla al
extracto disminuyó la presencia del
topatógeno, por lo que es necesario
evaluar en futuros trabajos un mayor
tiempo de exposición de la semilla en
dosis más altas del extracto etanólico
de L. palmeri para lograr el control
de este topatógeno. Al respecto
Onaran y Yanar (2016) y Iqbal et al.
(2019), mencionan la importancia de
determinar en los extractos vegetales
la dosis de inhibición por topatógeno
para posteriormente aplicar una dosis
que garantice una mejor eciencia
para su control.
La baja eciencia del fungicida
sintético para el control de F.
oxysporum en las semillas de
garbanzo probablemente se deba
a la resistencia hacia los grupos
químicos del fungicida, la virulencia
del topatógeno, susceptibilidad del
hospedero, condiciones abióticas, entre
otros (Mengist et al., 2018).
Conclusiones
El extracto etanolicó de L. palmeri
disminuyó in vitro el crecimiento
radial de F. solani y F. oxysporum y
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su aplicación en semillas de garbanzo
redujo la incidencia de ambos
topatógenos. Los extractos de plantas
pueden ser una opción eciente en
el manejo de hongos topatógenos
asociados a semillas, siendo una
solución ecológica y de bajo costo.
Literatura citada
Andrade-Bustamante, G., L. Cervantes-
Díaz, C. Ail-Catzim, C. del Toro-
Sánchez, J. Borboa-Flores, P.
Preciado-Rangel, F. Martínez-Ruiz y
E. Rueda-Puente. 2018. Potential of
oregano and cachanilla extracts for
the control of phytopathogenic fungi
in tomato fruits. ITEA 114(4): 344-
352.
Borboa-Flores, J., E. Rueda-Puente, E.
Acedo-Félix, J. Ponce, M. Cruz-
Villegas, J. García-Hernández y M.
Ortega-Nieblas. 2010. Evaluación
de la actividad antibacteriana
in vitro de aceites esenciales
contra Clavibacter michiganensis
subespecie michiganensis
. Trop.
Subtrop. Agroecosyst. 12(3): 539-547.
Daryaei, A., E. Jones, T. Glare y R. Falloon.
2016. Nutrient amendments affect
Trichoderma atroviride conidium
production, germination and
bioactivity. Biol. Control 93: 8-14.
El Hazzat, N., A. Touhami, M. Chliyeh, A.
Erri, K. Selmaoui, R. Benkirane y
A. Douira. 2019. Effect of a composite
endomycorrhizal inoculum on the
manifestation of chickpea wilt,
caused by Fusarium solani. Plant
Cell Biotech. Mol. Biol. 486-500.
Frac, M., A. Gryta, K. Oszust y N. Kotowicz.
2016. Fast and accurate microplate
method (biolog mt2) for detection
of Fusarium fungicides resistance/
sensitivity. Front. Microbiol. 7(489):
1-16. Gutiérrez-Grijalva, E., M.
Antunes-Ricardo, B. Acosta-Estrada,
J. Gutiérrez-Uribe y J. Heredia. 2019.
Cellular antioxidant activity and
in vitro inhibition of α-glucosidase,
α-amylase and pancreatic lipase of
oregano polyphenols under simulated
gastrointestinal digestion. Food Res.
Int. 116: 676-686.
Iqbal, J., B. Abbasi, T. Mahmood, S. Kanwal,
R. Ahmad y M. Ashraf. 2019. Plant-
extract mediated green approach for the
synthesis of ZnONPs: Characterization and
evaluation of cytotoxic, antimicrobial and
antioxidant potentials. J. Mol. Struct. 1189:
315-327.
Lattanzio, V., V. Lattanzio y A. Cardinali. 2006. Role
of phenolics in the resistance mechanisms
of plants against fungal pathogens and
insects. Phytochemistry: Advances in
Research, ISBN: 81-308-0034-9 Editor:
Filippo Imperato. Research Signpost
37/661 (2), Fort P.O., Trivandrum-695 023,
Kerala, India. Pp- 23-67.
Leyva-López, N., V. Nair, W. Bang, L. Cisneros-
Zevallos y J. Heredia. 2016. Protective role
of terpenes and polyphenols from three
species of oregano (Lippia graveolens,
Lippia palmeri and Hedeoma patens) on
the suppression of lipopolysaccharide-
induced inammation in RAW 264.7
macrophage cells. J. Ethnopharmacol. 187:
302-312.
Melo, P., E. Alves, C. Martins, A. Anjos Neto,
K. Pinto, L. Araújo, C. Vieira y L.
Nascimento. 2016. Extracts of Caesalpinia
ferrea and Trichoderma sp. on the control
of Colletotrichum sp. transmission in
Sideroxylon obtusifolium
seeds. Rev. Bras.
Plantas Med. 18(2): 494-501.
Mengist, Y., S. Sahile, A. Sintayehu y S. Singh.
2018. Evaluation of chickpea varieties
and fungicides for the management of
chickpea Fusarium wilt disease (Fusarium
oxysporum f.sp. ciceris) at Adet Sick Plot
in Northwest Ethiopia. Int. J. Agro. 7.
Morales, J., L. Mendoza y M. Cotoras. 2017.
Alteration of oxidative phosphorylation
as a possible mechanism of the antifungal
action of p‐coumaric acid against Botrytis
cinerea. J. Appl. Microbiol. 123(4): 969-
976.
Nene, Y., V. Sheila y S. Sharma. 1996. A world
list of chickpea and pigeonpea pathogens.
(V Edition), ICRISAT, Patancheru (A.P.)
India, pp. 1-27.
Oliva-Ortiz, L., T. Velázquez-Alcaraz, R. Sosa-
Pérez, L. Partida-Ruvalcaba, T. Díaz-
Valdés, J. Arciniega-Ramos y C. López-
Orona. 2017. Control de la fusariosis
vascular del garbanzo (Cicer arietinum L.)
por microorganismos nativos de Sinaloa,
México. Agrociencia 51: 683-695.
385
Esta publicación cientíca en formato digital es continuación de la Revista Impresa: Depósito legal pp 196802ZU42, ISSN 0378-7818.
Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2020, 37: 368-386. Octubre-Diciembre.
Romero-Bastidas et al. ISSN 2477-9407
Onaran, A, y Y. Yanar. 2016. In vivo and in vitro
antifungal activities of ve plant extracts
against various plant pathogens. Egypt. J.
Biol. Pest Co. 26(2): 405.
Ortega-Murrieta, P., G. Fierros-Leyva, I. Padilla-
Valenzuela, V. Valenzuela-Herrera, J.
Acosta-Gallegos, E. Gutiérres-Perez, S.
Velarde-Félix y F. Rodríguez-Cota. 2016.
Blanoro, nueva variedad de garbanzo
blanco de grano extra grande para
exportación. Rev. Mex. Cienc. Agríc.
7(1): 209-216.
Ortega-Nieblas, M., M. Robles-Burgueño,
E. Acedo-Félix, A. González-
León, A. Morales-Trejo y L.
Vázquez-Moreno. 2011. Chemical
composition and antimicrobial
activity of oregano (Lippia palmeri
S. Wats) essential oil. Rev. Fitotec.
Mex. 34(1): 11-17.
Oyedemi, S., A. Okoh, L. Mabinya, G.
Pirochenva y A. Afolayan. 2009. The
proposed mechanism of bactericidal
action of eugenol, γ-terpineol
and γ-terpinene against Listeria
monocytogenes, Streptococcus
pyogenes, Proteus vulgaris and
Escherichia coli. Afr. J. Biotechnol.
8: 1280-1286.
Radulovic, N., P. Blagojevic, Z. Stojanovic-
Radic y N. Stojanovic. 2013.
Antimicrobial plant metabolites:
structural diversity and mechanism
of action. Curr. Med. Chem. 20(7):
932-952.
Sankar, P., S. Vanitha, A. Kamalakannan,
P. Raju y P. Jeyakumar. 2018.
Prevalence of Fusarium oxysporum
f. sp. ciceris causing wilt in chickpea
and its pathogenic, cultural and
morphological characterization.
Int. J. Curr. Microbiol. Appl. Sci.
7(2): 1301-1313.
Sankar, P., S. Vanitha, A. Kamalakannan,
P. Raju y P. Jeyakumar. 2019.
Biological management of
Fusarium wilt in chickpea (Cicer
arietinum L.) caused by Fusarium
oxysporum f. sp. ciceris. Legume
Res. 42(6): 838-843.
Sayuri, I., M. Duarte, P. Carmignani, C.
Pulcinelli y M. Machado. 2018.
Effect of fungal incidence on
physiological quality of tobacco
seeds used in Brazil. Arq. Ins. Biol.
85: 1-6.
Şesan, T., E. Enache, B. Iacomi, M. Oprea,
F. Oancea y C. Iacomi. 2015.
Antifungal activity of some plant
extracts against Botrytis cinerea
Pers. in the blackcurrant crop
(Ribes nigrum
L.). Acta Sci. Pol-
Hortoru. 14(1): 29-43.
Shirazi, M., M. Abid, F. Hussain, A. Abbas y
U. Sitara. 2020. Antifungal activity
of some medicinal plant extracts
against soil-borne phytopathogens.
Pak. J. Bot. 52(2): 679-685.
Shuping, D. y J. Eloff. 2017. The use of
plants to protect plants and food
against fungal pathogens: A review.
Afr. J. Tradit. Complement. Altern.
Med. 14(4): 120-127.
Soylu, S., H. Yigitbas, E. Soylu y S. Kurt.
2007. Antifungal effects of essential
oils from oregano and fennel
Sclerotinia sclerotiorum. J. Appl.
Microbiol. 103: 1021-1030.
Sunkad, G., H. Deepa, T. Shruthi y D.
Singh. 2019. Chickpea wilt: status,
diagnostics and management.
Indian Phytopathol. 1-9.
Tala, M., M. Ansary, F. Talontsi, T.
Kowa, M. Islam y P. Tane. 2018.
Anthraquinones and avanols
isolated from the vegetable
herb Rumex abyssinicus inhibit
motility of Phytophthora capsici
zoospores. S. Afr. J. Bot. 115: 1-4.
Tlemsani, M., Z. Fortas, S. Dib y M.
Bellahcen. 2020. Inoculation with
Streptomyces decreases vascular
wilt of chickpea infected by
Fusarium oxysporum f. sp. ciceri.
South Asian J. Exp. Biol. 9(6): 249-
254.
Tornuk, F., I. Ozturk, O. Sagdic, A. Yilmaz
y O. Erkmen. 2014. Application of
predictive inactivation models to
evaluate survival of Staphylococcus
aureus in fresh-cut apples treated
with different plant hydrosols. Int.
J. Food Prop. 17(3): 587-598.
Wang, K., S. Jiang, T. Pu, L. Fan, F. Su y
M. Ye. 2018. Antifungal activity of
phenolic monoterpenes and structure-
related compounds against plant
pathogenic fungi. Nat. Prod. Res.
33(10): 1423-1430.
386
Esta publicación cientíca en formato digital es continuación de la Revista Impresa: Depósito legal pp 196802ZU42, ISSN 0378-7818.
Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2020, 37: 368-386. Octubre-Diciembre.
Romero-Bastidas et al. ISSN 2477-9407
Wang, S., Y. Zheng, F. Xiang, S. Li y G.
Yang. 2016. Antifungal activity of
Momordica charantia seed extracts
toward the pathogenic fungus
Fusarium solani
L. J. Food Drug
Anal. 24(4): 881-887.
Wangkhem, B., M. Rana y K. Jackson. 2019.
Exploring the control measures of
white rust-organic amendments,
botanicals, biocontrol agents
and chemicals. J. Pharmacogn.
Phytochem. 8(3): 4413-4419.
